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LC-310高效液相色谱仪的常用数据处理方法

 更新时间:2022-05-19 点击量:589
   高效液相色谱仪(HPLC)是应用高效液相色谱原理,主要用于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定的和分子量大的有机化合物的仪器设备。它由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中做相对运动时,经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。HPLC广泛应用于生命科学、食品科学、药物研究以及环境研究中。
  LC-310高效液相色谱仪的仪器本身是记录样品通过检测器时,吸光度的变化而产生的电信号变化,从而产生色谱谱图,最终的结果就要靠后期的色谱数据处理系统。
  谱图处理完即可制作校正曲线,校正曲线是数据处理的重点,是将标样谱图的信息与数据做成一个标准,供处理试样谱图使用。校正是通过分析指定的准备好的标准样品,来确定计算绝对组分浓度的响应因子的过程。接下来介绍常用的数据处理方法:
  1.外标法
  外标法是指添加一定量的标准品于空白样品中制成对照样品,与未知检测样品平行进行样品处理并检测,根据对照品响应值与标准品的浓度函数关系计算出未知检测样品中被测组分浓度的定量方法。
  2.内标法
  内标法指的是将一定重量的纯物质作为内标物加到一定量的被测样品混合物中,然后对含有内标物的样品进行色谱分析,分别测定内标物和待测组分的峰面积及相对校正因子,按公式计算出被测组分的含量。
  3.两种数据处理方法的区别
  内标法是把标准物质加入到被测样品中,外标法不是把标准物质加入到被测样品中,而是在与被测样品相同的色谱条件下单独测定。
  1、外标法要求仪器重复性很严格,适于大量的分析样品,因为仪器随着使用会有所变化,因此需要定期进行曲线校正。此法的特点是操作简单,计算方便,不需测量校正因子,适于自动分析。但仪器的重现性和操作条件的稳定性必须保证,否则,会影响实验结果。
  2、内标法要求挺严格的,对于内标物的选择要有一定的原则,适于分析样品量较少的情况;不要求样品里的所有组分都出峰,只要内标物和所关注的组分出峰并分离好就可以了;定量准确,对进样量和操作条件的控制不很严格,但必须准确称量试样和内标物,否则会影响实验结果。